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17302193538人單核細胞趨化蛋白2（Monocyte Chemotactic Protein-2, MCP-2/CCL8）屬于CC趨化因子家族，在炎癥反應、免疫調(diào)節(jié)及腫瘤微環(huán)境中發(fā)揮重要作用。酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）是定量檢測CCL8的常用方法，具有高靈敏度、高特異性和可重復性等特點。本文詳細介紹CCL8 ELISA試劑盒的原理、實驗步驟、數(shù)據(jù)分析方法及其在科研與臨床中的應用。
CCL8是一種由單核細胞、巨噬細胞、成纖維細胞和某些腫瘤細胞分泌的趨化因子，主要通過與CCR1、CCR2和CCR5受體結(jié)合，招募單核細胞、T細胞和樹突狀細胞，參與炎癥、感染和腫瘤進展。ELISA技術(shù)因其操作簡便、高通量和高準確性，成為檢測CCL8蛋白表達水平的方法。
目前主流的CCL8 ELISA試劑盒采用雙抗體夾心法（Sandwich ELISA），其核心步驟如下：
微孔板預先包被抗CCL8單克隆抗體（捕獲抗體），可與樣本中的CCL8特異性結(jié)合。
加入待測樣本（血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清或組織勻漿），CCL8與包被抗體結(jié)合。
加入生物素標記的抗CCL8二抗（檢測抗體），形成“捕獲抗體-CCL8-檢測抗體"復合物。
加入鏈霉親和素-辣根過氧化物酶（Streptavidin-HRP），與生物素結(jié)合。
加入3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）底物，HRP催化TMB產(chǎn)生藍色產(chǎn)物，顏色深淺與CCL8濃度成正比。
加入硫酸終止反應，溶液由藍變黃。
在450 nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算CCL8濃度。
平衡試劑至室溫（20-25°C）。
配制標準品梯度（通常0-1000 pg/mL）。
加入標準品或待測樣本（100 μL/孔），37°C孵育1-2小時。
洗板（3-5次）去除未結(jié)合物質(zhì)。
加入生物素標記檢測抗體（100 μL/孔），37°C孵育1小時。
再次洗板后加入SA-HRP（100 μL/孔），37°C孵育30分鐘。
加入TMB底物（100 μL/孔），避光反應15-30分鐘。
加入終止液（50 μL/孔），立即測定OD450 nm。
繪制標準曲線（log濃度 vs. log OD值）。
計算樣本CCL8濃度（使用四參數(shù)或線性回歸擬合）。
感染性疾病：檢測HIV、肝炎病毒感染后CCL8水平變化，評估炎癥程度。
自身免疫病：研究類風濕關(guān)節(jié)炎（RA）、系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）中CCL8的作用。
CCL8促進腫瘤相關(guān)巨噬細胞（TAMs）浸潤，與乳腺癌、肺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)。
評估抗炎藥物或趨化因子受體（CCR1/CCR2/CCR5）抑制劑對CCL8的調(diào)控作用。
作為炎癥或腫瘤的生物標志物，輔助疾病監(jiān)測和預后評估。
樣本處理：避免反復凍融，離心去除顆粒物。
標準曲線：確保R2 > 0.99，否則需重復實驗。
交叉反應：驗證抗體特異性，避免CCL7、CCL13等類似因子的干擾。
CCL8 ELISA試劑盒為研究炎癥、免疫調(diào)控及腫瘤生物學提供了可靠工具。通過優(yōu)化實驗條件并嚴格質(zhì)量控制，可準確檢測CCL8表達水平，助力基礎(chǔ)研究與臨床轉(zhuǎn)化。
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