人支鏈氨基酸（BCAA）試劑盒（ELISA）原理

發布時間：2017-05-03 點擊次數：3262次

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中人支鏈氨基酸（BCAA）的含量。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被人支鏈氨基酸（BCAA）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人支鏈氨基酸（BCAA）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

需要而未提供的試劑和器材

酶標儀（450nm）
高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
37℃恒溫箱
蒸餾水或去離子水

試劑盒組成

名稱	96孔配置	48孔配置	備注
微孔酶標板	8孔×12條	8孔×6條	無
標準品	0.3mL*6管	0.3mL*6管	無
樣本稀釋液	6mL	3mL	無
檢測抗體-HRP	10mL	5mL	無
20×洗滌緩沖液	25mL	15mL	按說明書進行稀釋
底物A	6mL	3mL	無
底物B	6mL	3mL	無
終止液	6mL	3mL	無
封板膜	2張	2張	無
說明書	1份	1份	無
自封袋	1個	1個	無

備注：

1. 標準品濃度依次為：80、40、20、10、5、2.5 ug/ml

2. 經過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過zui大標準品濃度時，可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。

注意事項

嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。
底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液不能使用。
避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。
在儲存和溫育時避免強光直接照射。
平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。
不能使用過期產品。
如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。

試劑準備

試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

操作步驟

從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

實驗結果計算

以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。

試劑盒性能

檢測范圍：2.5 ug/ml – 80 ug/ml。
靈敏度：zui低檢測濃度小于0.1 ug/ml。
特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
重復性：板內變異系數小于10% ，板間變異系數小于15% 。

人支鏈氨基酸（BCAA）試劑盒（ELISA）原理

說明

上一篇：昆蟲多巴脫羧酶（DOPA）試劑盒（ELISA）廠家

下一篇：人β淀粉樣蛋白1-42ELISA試劑盒檢測原理

返回列表>>

首頁公司簡介新聞資訊產品展示技術支持資料下載在線咨詢聯系我們

在線咨詢

聯系我們

傳真：

郵箱：2450868877@qq.com

地址：上海市楊浦區鐵嶺路32號1519-10室

掃一掃，關注我們

17302193538